《柳叶刀》公布新冠彩照;中华医学会检验分会发布《新型冠状病毒核酸检测建议》 其他

梦醒 8月前 811

《柳叶刀》公布新型冠状病毒彩照,果然“漂亮”的玫瑰都带刺!  新型冠状病毒肺炎疫情蔓延,国内外科研机构对于新型冠状病毒本身的研究也在持续深入。近日,顶级医学杂志《柳叶刀》(The Lancet)就公布了新型冠状病毒(2019-nCoV/novel coronavirus)的彩色照片  

                     微信图片_20200205103732.jpg

这是一张经过渲染的伪彩色照片,颜色十分艳丽,但也掩盖不了新型冠状病毒的狰狞面貌,表面布满了冠状物,仿佛恶魔的嘴一样。

来源:快科技 



2019-新型冠状病毒(2019-nCov)核酸检测建议

中华医学会检验医学分会分子诊断学组

  


一、适用范围


适用于采用RT-PCR方法检测2019-新型冠状病毒核酸。

二、规范性引用文件 


《医疗机构临床基因扩增检验工作导则》(卫办医政发[2010]194 号)

《实验室生物安全通用要求》GB 19489-2008,2009 年 7月 1 日起实施。

《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则(WS233-2002)》中华人民共和国卫生行业标准,2002-12-03 发布,2003-08-01 实施。

《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定》,卫生部第 45 号令 2006 年 2 月 1 日《WS/T 640-2018》临床微生物学检验标本的的采集和转运《国家卫健委办公厅关于医疗机构开展新型冠状病毒核酸检测有关要求的通知》,国卫办医函[2020]53号

三、工作程序

(一) 标本采集

  1.标本采集人员应按三级防护配备防护用品,包括防护服、一次性工作帽、医用防护口罩(N95)、护目镜、面罩、双层手套、防水靴和鞋套。

  2.配备防止病原微生物扩散和感染的设施,如处理生物的垃圾桶、处理紧急意外事件的药具,具有一定的通风条件等。

  3.标本采集

  3.1 鼻拭子标本:采集病人发病3日内的鼻拭子标本,用无菌植绒拭子采样,将拭子贴鼻孔壁慢慢转动进入病人一鼻孔内,至鼻腭处,然后边擦拭边旋转慢慢取出。以同一拭子擦拭另一鼻孔;迅速将纤维拭子放入装有2ml裂解液(与核酸提取试剂盒中裂解液相同)并贴有条形码的标本管中,在靠近顶端处折断无菌拭子杆,旋紧管盖并用封口膜封闭,75%酒精喷洒标本采集管外部立即放入标有“生物危险”密封袋中并封口,75%酒精喷洒密封袋外部后及时送检。

  3.2 咽拭子标本:采集病人发病3日内的咽拭子标本,用无菌植绒拭子采样,适度用力拭抹咽后壁部位,应避免触及舌部;迅速将无菌纤维拭子放入装有2ml裂解液并贴有条形码的标本管中,在靠近顶端处折断拭子杆,旋紧管盖并用封口膜封闭,75%酒精喷洒标本管消毒后放入标有“生物危险”密封袋中、封严封口,75%酒精喷洒密封袋外部后及时送检。

  3.3 痰液标本

  收集深部咳嗽痰液或抽吸痰于一次性无菌旋盖采样杯中,采样杯预先贴好条码,采样杯中装入2ml生理盐水。收集痰液后盖紧标本盖并用75%酒精对杯本容器外部消毒,放入标有“生物危险”密封袋中、封严封口并用75%酒精对密封袋外部消毒后送检。

  3.4 肺泡灌洗液(BALF)

  由临床医生无菌操作下吸取10ml~20ml BALF(≥5 ml)到贴有条形码并带螺帽无菌容器中,收集标本后盖紧标本盖并用75%酒精对杯本容器外部消毒,放入标有“生物危险”密封袋中、封严封口并用75%酒精对密封袋外部消毒后送检。

  3.5 粪便标本:如患者发病早期出现腹泻症状,则留取粪便标本3-5g(黄豆大小),标本收集于含2ml生理盐水并贴有条形码的带螺帽标本采集管中。

  3.6 血液标本使用含有EDTA抗凝剂的真空釆血管采集血液标本2-4ml

(二) 标本运输

  1.标本采集后应尽快送检,采集后在2 h~4 h内送到实验室。血液标本室温运送,其他标本在2 ℃~8 ℃下转运;若运送时间超过24 h,标本宜在-70 ℃或更低的温度下保存,短距离转运应在2 ℃~8 ℃下进行,长距离转运应采用干冰运输。

  2.需要远距离运输应当按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定》(卫生部令第45号)办理《准运证书》。转运者安全防护同前,并随身携带75%酒精,以便发生意外时能及时处理。司机佩戴外科口罩或N95口罩,用院内专用车辆。如果经航空运输,则运输包装属于A类,并遵循相应法规管理。

  3.标本运输容器应当防水、防破损、防泄露、耐高(低)温、耐高压。运输容器和包装材料上应有相关规定的生物危害标识、警示语和提示语。

  4.应使用三层包装系统,即内层容器、中层包装和外层包装。防漏的内层容器包装后贴上生物危害标识后装入中层容器,将“感染性物品”标记贴在外层包装上。内层容器和中层容器间应放置足量的吸水性材料,中层容器应固定在硬质外层容器中。中层容器与外层容器间应放置凝胶冰袋。

(三)标本接收

  1.标本运送人员和接收人员对标本进行双签收。标本接收人员按二级防护佩戴防护设备。

  2.接收标本前应检查标本运送箱外包装是否无破损,打开容器前后对标本运送箱用75%酒精喷洒消毒。取出标本密封袋后对密封袋用75%酒精喷洒消毒,并检查是否密封好,立即将标本放入专用冰箱冷藏保存。

  3.标本不能及时处理的应置于-80℃冰箱保存。

(四)试剂准备

  试剂配制人员按《医疗机构临床基因扩增检验工作导则》穿工作服,戴一次性医用帽子和手套,按试剂说明书准备足量的试剂,为了便于结果分析,每份样本最好进行3次平行测定。

(五)标本前处理

  1.标本前处理及核酸提取操作的工作人员应按标本采集人员要求进行三级防护。标本前处理应在具有外排功能的生物安全柜中操作。生物安全柜中应配备两个废物桶,一个桶中装0.55%含氯消毒液,另一个桶中装1mol/L稀盐酸。前一个废物桶用于丢弃标本及与标本接触过的实验耗材,后一个用于装接触过核酸的耗材。

  2.取出标本后将标本容器用75%酒精喷洒消毒。

  3.咽拭子和鼻咽拭子如果可直接用于核酸提取,当实验室条件不够时可增加病毒灭活步骤。

  4.血液标本,3000rpm离心10分钟,打开离心机后取出标本,冰浴3min~5min后再进行下一步操作。吸取血浆提取核酸。

  5.对痰液、肺泡灌洗液和大便标本应充分振荡混匀后进行病毒灭活。

  6.病毒灭活。提前将水浴箱预热至56℃,将需要灭活的标本从密封袋中取出,放入水浴锅中的试管架上,标本盖上搁置重物防止标本采集管漂浮。每隔10min将标本摇匀一次,灭活时间40min。可据提取试剂所采用的温度调整灭活温度,但不能低于56℃,在提高温度后可适当缩减灭活时间,优化灭活条件最好有预实验支持,保证标本能在有效温度下有足够时间灭活。

  痰液或肺泡灌洗液中如果有浓痰无法吸样时,可尝试进行液化处理,在灭活标本中加入4倍体积4% NaOH,室温放置10min, 12000rpm离心5min,去上清后加入生理盐水悬浮,12000rpm离心5min,去上清后再用生理盐水悬浮,12000rpm离心5min,去上清后留约200μL用于核酸提取。

(六)核酸提取和加样

  1.用75%酒精对生物安全柜进行消毒,并紫外照射30min。同时将核酸提取仪用75%酒精处理并照射紫外30min。

  2.将灭活标本从水浴锅中取出,3000rpm离心5分钟,打开离心机后取出标本,冰浴3min~5min。

  3.打开标本采集管,吸取200μL标本(动作轻柔)加入核酸提取试剂中。为保证人员安全和核酸提取纯度和效率,可采用基于磁珠吸附的自动化核酸提取方法。

  4.处理完标本后应对生物安全柜、工作台面、移液器等用品用75%酒精处理。

  5.核酸提取完后立即将提取物进行封盖处理。并对核酸提取仪用75%酒精处理并照射紫外30min。在生物安全柜内将提取核酸加至反应管中。

  6.完成核酸提取后应用75%酒精在实验室内空气中喷洒,10min后开启实验室紫外灯照射30min。紫外照射后,工作人员可着一次性医用帽子、手套、隔离服、鞋套进入实验室,用1mol/L的盐酸处理工作台面和地面,并开启实验室通风装置通风1h,后用清水清洁台面和地面。

(七)核酸扩增

  扩增区工作人员可按二级防护佩戴防护用品,即穿隔离衣、戴一次性医用帽子、医用防护口罩(N95),面罩,鞋套和单层手套。按试剂说明进行操作。

  扩增后产物置于含1mol/L的稀盐酸中,应将产物全部浸泡至液体中,浸泡后将扩增产物转移出实验室或将扩增产物用一次性医疗垃圾袋装好扎紧转移至扩增产物废物处理区。

  扩增完成后空气用75%酒精消毒处理,再用紫外灯照射30min,最后用1mol/L稀盐酸擦拭台面和地面清洁。为防止稀盐酸对仪器设备的腐蚀,在清洁后应及时通风,通风时间不得少于1h,再用清水清洁台面和地面。

四、废弃物处理


  1. 与标本接触过的医疗废物,如tip头、采样管、EP管等应用0.55%含氯消毒液处理,经高压灭菌后按医疗废物处理。

  2. 防护服、鞋套、手套、口罩用75%酒精消毒后收集于医疗垃圾袋中经高压后按医疗废物处理。

  3 标本提取与加样过程中与核酸接触过的材料,如tip头、EP管、核酸提取槽等浸泡于稀盐酸中,浸泡时间不少于1h,浸泡后经高压后按医疗废物处理。

  4. 建议扩增产物在专门的房间进行后续处理,将浸泡于稀盐酸中的产物在稀盐酸液体中开盖,切记不能在空气中开盖浸泡过核酸的溶液用碱进行中和后可按医疗废水处理,扩增用的试管,如八联管经高压后按医疗废物处理。

来源:中华医学会检验医学分会分子诊断学组

最新回复 (0)
返回
发新帖