一例全血γ干扰素释放实验假阴性的分析

结核病是由结核分枝杆菌经呼吸道侵入人体感染引起的、主要引起肺部炎症的慢性传染性疾病，在临床上表现为结核分枝杆菌潜伏感染和活动性结核病[1]，其诊断方法一般为结核分枝杆菌抗酸染色涂片、结核分枝杆菌培养技术、结核菌素实验、结核分枝杆菌γ干扰素释放实验（interferon gamma release assay, IGRA）等[2]。

γ干扰素释放实验基于细胞免疫，主要原理为利用早期分泌靶抗原6（early secretory antigenic target-6, ESAT-6）和培养滤液蛋白10（culture filtrate protein-10, CFP-10）刺激结核分枝杆菌抗原致敏的记忆性T细胞释放γ干扰素，进而测定其释放含量，用于结核病的辅助诊断，该实验的特异度高，并且不受卡介苗接种及大多数非结核分枝杆菌的干扰[3, 4]。

患者，男，64岁。主诉：间断发热4月，意识不清3小时急诊入院。进行胸部CT检查考虑重度左肺脓肿，双肺感染，同时还患有膜性肾病，冠状动脉粥样硬化性心脏病，电解质紊乱，低蛋白血症等。

实验室检查：如图1所示痰涂片抗酸染色镜下可见抗酸阳性杆菌（1+），图2所示γ干扰素释放实验结果为阴性（实验都在质控范围内，使用试剂盒为安图生物的结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂盒（磁微粒化学发光法），仪器为AutoLumo A2000 Plus），图3所示肺泡灌洗液涂片抗酸染色镜检可见抗酸阳性杆菌（1+）。痰涂片和肺泡灌洗液涂片结果与γ干扰素释放实验发生了矛盾。

图1

图2

图3

联系临床，医生结合患者的临床表现高度怀疑肺结核，建议患者转到专科医院进行治疗。后期随访与患者家属进行沟通，得知该病人在专科医院按照肺结核治疗病情出现好转。

当抗酸染色涂片与γ干扰素释放实验结果出现矛盾时我们立马查找原因。查看γ干扰素释放实验试剂盒说明书发现样本中的异嗜性抗体可能会干扰检测结果，需结合患者病史；同时自身免疫系统缺陷如艾滋病或免疫抑制治疗患者等其他免疫系统异常疾病患者可能会在检测中出现假阴性或不正确结果。进一步查阅文献发现酶联免疫斑点测定法(T-SPOT.TB)和全血酶联测定免疫吸附测定法(QFT-GIT)的γ-干扰素(IFN-γ)释放试验(IGRA)在肺外结核的诊断中存在5%-20%的假阴性率[5]，淋巴细胞减少的患者有可能导致IGRA阴性，血糖控制情况、糖尿病患者严重程度也有可能影响IGRA结果[6]，同时免疫功能缺陷或低下或者接受免疫抑制剂治疗也可能出现假阴性结果[4]。该患者血常规检查中淋巴细胞减少（图4），生化结果显示其总蛋白和白蛋白都下降（图5），同时患者患有膜性肾病，因此有可能是因为该患者免疫功能异常造成了IGRA实验假阴性。

图4

图5

根据结核分枝杆菌γ-干扰素释放试验及临床应用专家意见(2021年版)（图6），IGRA用于肺结核辅助诊断时，当涂片、MTB核酸、培养之一为阳性，不建议再开展IGRA检测。

图6：引用于“结核分枝杆菌γ-干扰素释放试验及临床应用专家意见(2021年版)”

综上所述，当我们在工作中遇到类似检验结果矛盾或检查结果与患者病情不符时，首先需要了解实验基本原理，然后再结合临床医生及查阅相关文献，争取为临床诊疗工作提供准确可靠的检测依据。

参考文献：

[1] 肖海浩 and 张言斌. 结核分枝杆菌潜伏感染研究进展[J]. 实用医学杂志, 2022, 38(6): 664-668.

[2] 王森 and 张文宏. 结核病诊断技术新进展[J]. 微生物与感染, 2016, 11(3): 188-192.

[3] 卫卫, 肖和平, 李红, et al. 两种γ-干扰素释放试验方法在结核病诊断中的应用价值比较[J]. 中国防痨杂志, 2015, 37(7): 768-773.

[4] 中华医学会结核病学分会. 结核分枝杆菌γ-干扰素释放试验及临床应用专家意见(2021年版)[J]. 中华结核和呼吸杂志, 2022, 45(02): 143-150.

[5] Metcalfe JZ, Everett CK, Steingart KR, et al. Interferon-γ release assays for active pulmonary tuberculosis diagnosis in adults in low- and middle-income countries: systematic review and meta-analysis[J]. J Infect Dis, 2011, 204 Suppl 4(Suppl 4): S1120-1129.

[6] 陈彬, 朱涛, and 李长毅. 外周血干扰素-γ释放试验诊断结核性胸膜炎的假阴性影响因素分析[J]. 重庆医学, 2020, 49(4): 534-538,543.

文章作者：胡婉雪、万园园、李敏

单位：河南省滑县人民医院检验科

编辑：伟